Rotavirusna infekcija

Gripa

Rotavirusna infekcija ili intestinalna / želučana gripa je zarazna bolest sa simptomatskim liječenjem. Rotavirusna infekcija je najčešća kod djece.

Rotavirusna infekcija predstavlja posebnu opasnost za djecu jer se većina infekcija javlja upravo u toj populaciji.

Uzročnik rotavirusne infekcije

Infekcija je uzrokovana rotavirusima - virusima obitelji Reoviridae, koji su međusobno slični u antigenskom sastavu.

Izvor zaraze

Izvor zaraze je bolesna osoba. Najopasniji u smislu prijenosa infekcije je pacijent u prva 3 - 5 dana kliničkih manifestacija rotavirusne infekcije, budući da je u tom razdoblju najveći sadržaj virusa u izlučenim izlučevinama.

Mehanizam prijenosa

Glavni mehanizam prijenosa virusa je fekalno-oralni, rjeđe - kontakt-kućni put propagacije putem prijenosa rotavirusa sa zaraženim objektima. Posebno su opasni mliječni proizvodi. Niske temperature obično ne uništavaju virus, pa čuvanje hrane u hladnjaku ne sprječava razvoj rotavirusne infekcije.

Razdoblje epidemijske rotavirusne infekcije

Pojava bolesti javlja se u jesensko-zimskom razdoblju, ali u drugim sezonama mogu postojati i slučajevi pojave bolesti. U pravilu, širenje i pojavljivanje karakterističnih simptoma rotavirusne infekcije popraćeno je pojavom epidemije gripe, stoga su ljudi zaraženi rotavirusom koji se češće naziva "crijevna gripa".

patogeneza

Nakon ulaska u ljudski organizam, virus ulazi u stanice sluznice tankog crijeva, što uzrokuje uništenje crevnih resica. Sinteza specifičnih enzima, kao i narušavanje sekretorne funkcije crijevne sluznice, dovodi do teške proljeva i dehidracije tijela zbog velike količine elektrolita i vode koja ulazi u crijevni lumen.

Simptomi infekcije rotavirusom:

  • nazalna kongestija;
  • grlobolja;
  • kašalj;
  • bol u trbuhu;
  • mučnina, povraćanje, proljev;
  • glavobolja, groznica.

klinika:

Glavna razdoblja infekcije rotavirusom:

  • razdoblje inkubacije traje 1-2 dana;
  • akutno razdoblje traje 3-7 dana;
  • oporavak, traje 4-5 dana.

Bolest je karakterizirana akutnim početkom, ali je moguća prisutnost prodromalnog razdoblja (oko 2 dana). Može uzrokovati bol, opću slabost, glavobolju, povećan umor, gubitak apetita, neugodne osjećaje i tutnjavu u želucu. Osim toga, razvoj manifestacija bolesti na dijelu gornjih dišnih putova je moguće: nazalna kongestija, bol u grlu, lagani kašalj.

Ukupna klinička slika uključuje sindrome trovanja, gastroenteritis i lezije gornjih dišnih putova.

Manifestacije gastroenteritis sindroma uključuju: glasno tutnjanje u trbuhu, bol, uglavnom na vrhu trbuha, mučnina, povraćanje, proljev. Proljev s infekcijom rotavirusom ima vodenu pjenastu konzistenciju te je žute ili zelenkastožute boje.

Pojava sindroma intoksikacije: umor, slabost, glavobolja. U teškim slučajevima: vrtoglavica, nesvjestica.

Poraz gornjih dišnih puteva karakterizira curenje iz nosa, kongestija nosa, bol u grlu, kašalj. Zev kad ima jarko crvenu boju.

Komplikacije i smrtnost

Teške oblike bolesti, praćene teškom dehidracijom, karakterizira razvoj kardiovaskularne insuficijencije, čak i smrti (u 2-3% slučajeva). Nakon infekcije nastaje nestabilna imunost, koja s vremenom slabi, pa je moguća ponovna infekcija.

Dijagnoza infekcije rotavirusom

Dijagnoza infekcije rotavirusom moguća je samo kada se rotavirus otkrije kod ljudi primjenom laboratorijskih dijagnostičkih metoda kao što su PCR - polimeraza lančana reakcija, RPHA - pasivna hemaglutinacijska reakcija, CSC - vezivanje komplementa, imunofluorescencija i mnogi drugi.

Potpuna krvna slika pokazat će leukocitozu s neutrofilnom lijevom pomakom, povećanu ESR - u akutnom razdoblju. Za period oporavka karakterizira se normalizacija krvne slike. Analiza urina će pokazati proteinske, leukocitne i crvene krvne stanice, hijalinske cilindre u malim količinama.

Rotavirusna infekcija - liječenje crijevne gripe kod odraslih i djece

Liječenje je simptomatsko, jer ne postoje specifični antirotavirusni lijekovi za borbu protiv rotavirusa.

Principi liječenja rotavirusne infekcije:

  1. Izolacija bolesnika s rotavirusnom infekcijom
  2. Borba protiv dehidracije. Za to je poželjno koristiti posebne otopine soli, na primjer, rehidron, fiziološku otopinu. Koriste se u liječenju bolesnika u bolnici, ali fiziološka otopina za ponovno uspostavljanje normalnog kiselinsko-baznog stanja tijela može se pripremiti kod kuće: 1 čajna žličica na 1 litru vode. Preporuča se piti puno mineralne vode.
  3. Borba protiv temperature mora početi na temperaturi od 38, 5 i više. U isto vrijeme, ovisno o vrsti groznice, potrebno je koristiti fizičke metode za smanjenje temperature, na primjer, trljanje tijela vodom, i kemikalije - uzimanje određenih lijekova, u djece je bolje koristiti svijeće.
  4. Prihvaćanje enzimskih pripravaka, adsorpcijskih i adstrigentnih sredstava (aktivni ugljen, polisorb), mliječnih bakterijskih pripravaka.
  5. Zabranjeno je uzimanje lijekova protiv bolova u trbuhu.

Indikacije za upućivanje u bolnicu zbog infekcije rotavirusom:

  • progresivno pogoršanje, produljena proljev;
  • pojavu novih simptoma.

Dijeta za infekciju rotavirusom:

Prehrana uključuje izbjegavanje mlijeka i mliječnih proizvoda, uključujući mliječne proizvode. Preporučljivo je uključiti u prehranu pileću juhu ili rižinu kašu, kuhanu u vodi bez dodavanja ulja. Potrebno je jesti u malim porcijama s pauzama. Preporučljivo je ograničiti unos hrane bogatu ugljikohidratima.

Prevencija infekcije rotavirusom

Ključne preventivne mjere za infekciju rotavirusom uključuju:

  • Sprječavanje ulaska virusa u tijelo, uključujući izoliranje oboljelih, redovito pranje ruku, konzumiranje dokazanih i visokokvalitetnih proizvoda, korištenje destilirane vode, pranje povrća i voća;
  • sanitarni nadzor ugostiteljskih objekata i proizvoda u trgovinama, tržištima.

Prije korištenja informacija koje se nalaze na stranicama medportal.org, pročitajte uvjete korisničkog ugovora.

Korisnički ugovor

Stranica medportal.org pruža usluge pod uvjetima opisanim u ovom dokumentu. Početkom korištenja web-mjesta potvrđujete da ste pročitali uvjete ovog Korisničkog ugovora prije korištenja web-lokacije i prihvatili sve uvjete ovog Ugovora u cijelosti. Nemojte koristiti web-mjesto ako se ne slažete s tim uvjetima.

Opis usluge

Sve informacije objavljene na stranicama služe samo kao referenca, informacije preuzete iz javnih izvora su referentne i ne oglašavaju se. Stranica medportal.org pruža usluge koje omogućuju korisniku da traži lijekove u podacima dobivenim u ljekarnama kao dio ugovora između ljekarni i medportal.org. Radi lakšeg korištenja podataka o lijekovima, dodaci prehrani sistematizirani su i dovedeni do jednog pravopisa.

Stranica medportal.org pruža usluge koje omogućuju korisniku pretraživanje klinika i drugih medicinskih informacija.

ograničenje odgovornosti

Informacije u rezultatima pretraživanja nisu javna ponuda. Administracija stranice medportal.org ne jamči točnost, potpunost i (ili) relevantnost prikazanih podataka. Administracija web-mjesta medportal.org nije odgovorna za štetu ili štetu koju ste možda pretrpjeli zbog pristupa ili nemogućnosti pristupa web-lokaciji ili zbog korištenja ili nemogućnosti korištenja ove web-lokacije.

Prihvaćanjem uvjeta ovog ugovora u potpunosti razumijete i slažete se da:

Informacije na stranicama služe samo kao referenca.

Administracija stranice medportal.org ne jamči odsutnost pogrešaka i odstupanja u odnosu na prijavljenu na web-lokaciji i stvarnu dostupnost robe i cijene robe u ljekarni.

Korisnik se obvezuje telefonskim pozivom u ljekarnu razjasniti informacije koje su od interesa ili upotrijebiti informacije koje su na raspolaganju.

Administracija stranice medportal.org ne jamči odsutnost pogrešaka i odstupanja u rasporedu rada klinika, njihove kontakt podatke - telefonske brojeve i adrese.

Ni uprava web-mjesta medportal.org, niti bilo koja druga strana uključena u proces pružanja informacija, neće biti odgovorni za bilo kakvu štetu ili štetu koju ste možda pretrpjeli zbog toga što ste se u potpunosti oslonili na informacije sadržane na ovoj web-stranici.

Administracija web-mjesta medportal.org se obvezuje i obvezuje se na daljnje napore kako bi se smanjila odstupanja i pogreške u dostavljenim informacijama.

Administracija stranice medportal.org ne jamči odsutnost tehničkih kvarova, uključujući i rad softvera. Administracija stranice medportal.org se obvezuje što je prije moguće uložiti sve napore kako bi se uklonili svi propusti i pogreške u slučaju njihovog nastanka.

Korisnik je upozoren da administracija stranice medportal.org nije odgovorna za posjet i korištenje vanjskih resursa, linkovi na koje se mogu nalaziti na stranicama, ne daje odobrenje za njihov sadržaj i nije odgovoran za njihovu dostupnost.

Administracija stranice medportal.org zadržava pravo obustaviti rad stranice, djelomično ili u potpunosti izmijeniti njezin sadržaj, izvršiti izmjene korisničkog ugovora. Takve izmjene vrše se samo po odluci Uprave bez prethodne najave Korisnika.

Prihvaćate da ste pročitali uvjete ovog Korisničkog ugovora i prihvatili sve uvjete ovog Ugovora u cijelosti.

Informacije o oglašavanju na kojem mjestu na web-lokaciji postoji odgovarajući ugovor s oglašivačem označene su "kao oglašavanje".

Rotavirusna infekcija

Rotavirusna infekcija (rotavirusni gastroenteritis) je akutna infektivna bolest uzrokovana rotavirusima, koju karakteriziraju simptomi opće intoksikacije i oštećenja gastrointestinalnog trakta s razvojem gastroenteritisa.

ICD-10 kod
A08.0. Rotavirusni enteritis.

Etiologija (uzroci) rotavirusne infekcije

Uzročnik je član obitelji Reoviridae, rod Rotavirusa (rotavirusa). Ime se temelji na morfološkoj sličnosti rotavirusa s kotačem (od latinskog "rota" - "kolo"). Pod elektronskim mikroskopom, virusne čestice izgledaju kao kotači sa širokim čvorištem, kratkim žbicama i jasno definiranim tankim rubom. Virus rotavirusa promjera 65-75 nm sastoji se od elektrona-gustog centra (jezgre) i dvije peptidne ljuske: vanjske i unutarnje kapside. Jezgra od 38-40 nm sadrži unutarnje proteine ​​i genetski materijal koji predstavlja dvostruka RNA. Genom rotavirusa u ljudi i životinja sastoji se od 11 fragmenata, što je vjerojatno razlog antigenske raznolikosti rotavirusa. Replikacija rotavirusa u ljudskom tijelu događa se isključivo u epitelnim stanicama tankog crijeva.

Rotavirusna infekcija, pogled u elektronskom mikroskopu

U rotavirusu su nađena četiri glavna antigena; glavni je antigen grupe, protein unutarnjeg kapsida. Uzimajući u obzir sve skupine-specifične antigene, rotavirusi su podijeljeni u sedam skupina: A, B, C, D, E, F, G. Većina ljudskih i životinjskih rotavirusa pripadaju skupini A, unutar koje se razlikuju podskupine (I i II) i serotipovi. Podskupina II uključuje do 70–80% sojeva izoliranih iz bolesnika. Postoje dokazi o mogućoj korelaciji određenih serotipova s ​​ozbiljnošću proljeva.

Rotavirusi su otporni na okolišne čimbenike: u pitkoj vodi, na otvorenim vodama i otpadnim vodama, oni traju do nekoliko mjeseci, za povrće - 25-30 dana, za pamuk, vunu - do 15–45 dana. Rotavirusi se ne uništavaju ponovljenim zamrzavanjem, pod djelovanjem dezinfekcijskih otopina, etera, kloroforma, ultrazvuka, ali umiru pri kuhanju, tretiraju se otopinama s pH većim od 10 ili manje od 2. Optimalni uvjeti za viruse: temperatura 4 ° C i visoka (> 90%) ili low (Autor: Infektivne bolesti: nacionalno vodstvo, urednik: ND Yuschuk, Yu. Ya Vengerov. 2009.

Dijagnoza infekcije rotavirusom

Tvrdim
Zamjenik voditelja
Glavni epidemiološki
Ministarstvo zdravstva SSSR-a
G.G.ONISCHENKO

7. ožujka 1989. N 15-6 / 6

Rotavirusna infekcija

(METODIČNE PREPORUKE)

Institut za poliomijelitis i virusni encefalitis, Akademija medicinskih znanosti SSSR-a.

Istraživački institut za epidemiologiju Ministarstva zdravstva SSSR-a;

Institut za epidemiologiju i mikrobiologiju. GN Gabrievskogo Ministarstvo zdravstva RSFSR;

Znanstveno-proizvodno društvo "Rostepidkompleks";

All-Union znanstveno-istraživački institut za dezinfekciju i sterilizaciju Ministarstva zdravstva SSSR-a.

Smjernice su namijenjene praktičarima i istraživačima zdravstvenih tijela i institucija.

Ljudski rotavirus spada u skupinu životinjskih virusa sličnih jedna drugoj, koja, osim toga, uključuje virus nebraske tele proljeva (NCDV), virus epizootske dijareje mladih miševa (EDJM), virus majmuna (SA-II), virus koji potječe iz crijevnih sadržaja ovaca i goveda (0), kao i uzročnici proljeva, ždrebadi, štenaca i drugih životinja. Svi ovi virusi imaju istu veličinu i oblik i međusobno su bliski u antigenskim uvjetima.

Rotavirusne životinje se dobro razmnožavaju u kulturi tkiva, stoga su izolirane i proučavane prije humanog rotavirusa. Rotavirusi teladi i majmuna, zbog svoje antigenske blizine ljudskom rotavirusu, korišteni su za utvrđivanje njegove etiološke uloge u akutnom gastroenteritisu i do sada su korišteni u serološkoj dijagnostici i za dobivanje imunoreagenata.

Ljudski rotavirus detektiran je elektronskom mikroskopijom u duodenalnim epitelnim stanicama i u ekstraktima fecesa tipičnih pacijenata, gdje je često sadržan u vrlo značajnim koncentracijama (do 10 čestica u 1,0 g fecesa). Virus rotavirusa je dvostruka kapsida (tj. Obložena dvoslojnim proteinskim omotačem) sferične čestice promjera 70 - 75 nm, sadrži ribonukleinsku kiselinu - RNA (11 dvolančanih segmenata), ima plutajuću gustoću u cezij kloridu od 1,36 g / cu. cm s koeficijentom sedimentacije 500 - 530 S

Prema dostupnim karakteristikama, ljudski rotavirus, zajedno s gore navedenim životinjskim virusima, bio je klasificiran kao rotavirusni rod obitelji Reoviridae. Ime "rotavirus" potječe od latinskog rota - kotača koji čestica virusa nalikuje elektronskim mikroskopskim preparatima.

Prema antigenskoj specifičnosti, detektiranoj ELISA testom, rotavirusi su podijeljeni u dvije podskupine (označene rimskim brojevima - I i II), a po specifičnosti, detektiranoj u reakciji neutralizacije, za 4 (a možda i više) serotipa (označene arapskim brojevima - 1). 2, 3, 4). Specifičnost podgrupa određenih rotavirusa određena je glavnim proteinom unutarnjeg kapsida, a njihova serotipska specifičnost određena je glikoproteinom vanjskog kapsida. Nedavno su otkriveni rotavirusi novog tipa (takozvani pararotavirusi) koji nemaju antigen specifičan za skupinu.

Rotavirusna infekcija je raširena. Informacije o njegovoj identifikaciji objavljene su u Australiji, Velikoj Britaniji, DDR-u, Kanadi, Indiji, Španjolskoj, SAD-u, Francuskoj, Japanu i mnogim drugim zemljama. U Sovjetskom Savezu, bolesti rotavirusnog gastroenteritisa zabilježene su među djecom i odraslima u brojnim regijama RSFSR-a, Transcaucasia, Ukrajine, baltičkih država, središnje Azije i drugih područja. Među djecom i odraslima, infekcija rotavirusom može se manifestirati u obliku sporadičnih slučajeva, bolesti lokalnih skupina i masovnih epidemija s pokrivenošću različitih skupina stanovništva na velikim područjima. Među hospitaliziranim bolesnicima s akutnim crijevnim infekcijama, udio odraslih s rotavirusnim gastroenteritisom u prosjeku iznosi 10-15%, djeca 15–27% ili više. Podaci iz literature o izolaciji rotavirusa (antigena) u zdrave djece i odraslih vrlo su kontradiktorni: od 0 do 0,5 do 42% u djece i od 0% do 7% ili više u odraslih. Rotavirusna infekcija se bilježi tijekom cijele godine. Međutim, više od 70% bolesnika otkriveno je u hladnoj sezoni. U zimsko-proljetnom razdoblju zabilježena je i većina epidemija rotavirusne infekcije među populacijom, kao i grupne bolesti među novorođenčadi i nedonoščadi, djeca organiziranih skupina, starije osobe. Nije bilo značajnih razlika u distribuciji rotavirusnih infekcija (i djece i odraslih) po spolu.

Izvor zaraze u akutnim crijevnim infekcijama rotavirusne etiologije su inficirani odrasli i djeca - bolesnici s manifestnim oblikom infekcije ili asimptomatskim izlučujućim rotavirusima s izmetom. U isto vrijeme, djeca prve godine života često su zaražena majkama zaraženim rotavirusom, a starija djeca i odrasli djeca organiziranih dječjih skupina. Infekcija ljudi od životinja nije dokazana, iako mogućnost isključivanja nije isključena. Trenutno se rotavirusi različitih serotipova nalaze u izlučevinama gotovo 50 vrsta životinja i ptica s izraženim znakovima proljeva i bez njih.

Rotavirusi u bolesnika i osoba bez kliničkih manifestacija bolesti trenutno se nalaze samo u fecesu. Pacijenti izlučuju rotaviruse u okoliš, počevši od prvog dana bolesti, dok je u svih bolesnika u prvih pet dana bolesti otkrivena maksimalna količina patogena u fecesu (do 10-10 virusnih čestica po 1 g), što određuje najveći epidemiološki rizik od pacijenata prema drugima. ovo razdoblje bolesti. Tijekom sljedećih 6 do 10 dana, oslobađanje rotavirusa s izmetom pacijenata naglo opada kako se stolica normalizira. Prosječno trajanje izlučivanja rotavirusa od strane pacijenata je 7–8 dana, ali kod nekih pacijenata ovo razdoblje može trajati i do 20-30 dana. Osobe bez kliničkih manifestacija bolesti mogu dugotrajno osloboditi rotavirusi s izmetom - do nekoliko mjeseci ili više (razdoblje promatranja).

Glavni mehanizam prijenosa rotavirusa je fekalno-oralni, koji se ostvaruje putem vode, hrane i domaćih prijenosnih putova. U slučaju sporadičnih i lokalnih skupina bolesti, infekcija s rotavirusima javlja se uglavnom kućanstvom. To doprinosi vrlo niskoj patogeni dozi rotavirusa (unutar 10 virusnih čestica). Utvrđeno je da rotavirusi na različitim mjestima okoliša održavaju sposobnost održivosti od 10-15 dana (ovisno o temperaturi i vlažnosti) do mjesec dana; u fecesu od nekoliko tjedana do sedam mjeseci.

Trenutno su u našoj zemlji i inozemstvu zabilježeni izbijanja rotavirusne infekcije vodom i hranom. Rotavirusi se nalaze u vodi rijeka, jezera, mora, podzemnih voda, vode iz slavine, određenih prehrambenih proizvoda (mlijeko, itd.).

Moguća je primjena u nekim slučajevima kapanja, prašine i drugih putova rotavirusa.

Rotavirusi su također poznati kao jedan od glavnih etioloških agensa u nozokominalnim (bolničkim) epidemijama akutnog gastroenteritisa. U bolnicama različitih profila može se zaraziti do 50-60% bolesne djece. Postoje slučajevi izbijanja bolesti u rodilištima. Često pogađa djecu koja su na umjetnom hranjenju, boluju od akutnih i kroničnih bolesti, s različitim vrstama imunodeficijencije.

Imunitet na osjetljivost. Ljudi svih dobnih skupina osjetljivi su na rotavirus. Najveća osjetljivost opažena je u djece u dobi od 6 mjeseci. do 2 godine. Antitijela na rotaviruse otkrivena su u 50–60% djece u prvoj godini života, u dobi preko 3 godine - više nego u 90% i kod gotovo svih odraslih osoba. Međutim, prema literaturi, prisutnost protutijela u serumu u osnovi upućuje samo na susret ljudskog tijela s rotavirusom, a ne na prisutnost imuniteta, jer čak i uz značajnu razinu humoralnih antitijela, moguće su ponovljene bolesti. Imunitet s infekcijom rotavirusom nije u potpunosti shvaćen. Vjeruje se da je rezistencija na infekciju uglavnom zbog lokalne imunosti stanica epitela tankog crijeva, što je povezano s prisutnošću protutijela klase IgA. Ta se antitijela nalaze iu mlijeku dojilje i, očigledno, služe kao čimbenik pasivne imunizacije novorođenčadi, koja, u nedostatku kliničkih manifestacija bolesti s izmetom, može osloboditi značajne količine rotavirusa u okoliš i zaraziti prerano rođene bebe i djecu s nepovoljnim premorbidnim pozadinama. Rotavirusi različitih serotipova ne stvaraju unakrsnu imunitet, pa stoga isto dijete ili odrasla osoba može imati ponovljene bolesti zbog drugih serotipova virusa. Nestabilna priroda imuniteta u bolesnika s rotavirusnim gastroenteritisom također je zabilježena, ponovljene bolesti su često zabilježene 1–1,5 godina nakon infekcije.

Značajke epidemijskog procesa s infekcijom rotavirusom:

- sveprisutnost teritorijalne raspodjele;

- ozbiljna zimska ili zimsko-proljetna sezonalnost;

- niska infektivna doza patogena i visoki žarišta u organiziranim skupinama;

- oštećenja osoba svih dobnih skupina;

- visok udio slučajeva među djecom mlađom od 2 godine uz maksimalno otkrivanje bolesti među djecom druge polovice života;

- visoka aktivnost voda i domaćih putova prijenosa;

- lokalitet kućnih žarišta, uglavnom ograničen na obitelj;

- mogućnost asimptomatske izolacije rotavirusa kod djece i odraslih;

- mogućnost bolničke infekcije uz sudjelovanje medicinskog osoblja i roditelja bolesne djece.

Klinička slika infekcije rotavirusom ima mnogo zajedničkog s kliničkim manifestacijama akutnih crijevnih bolesti različite etiologije, što otežava dijagnosticiranje ove bolesti. Međutim, postoje brojne karakteristične razlike koje omogućuju pravovremenu sumnju na ovu bolest i pravilno provođenje anti-epidemijskih i terapijskih mjera.

Period inkubacije je kratak i traje od 15 sati do 3 - 5 dana, a najčešće - 1 - 3 dana.

Većina pacijenata ima akutni početak bolesti, kada se cijeli kompleks simptoma razvija tijekom prvih dana bolesti. Kod male djece moguća je subakutna pojava, koju karakterizira pojava u prvim danima bolesti 1 ili 2 simptoma i dodatak ostatka od 2 do 3 dana bolesti. Naj patognomnija za infekciju rotavirusom je oštećenje gastrointestinalnog trakta, koje je u 60-70% bolesnika u kombinaciji s razvojem simptoma oštećenja respiratornog trakta. Ponekad kataralni simptomi mogu prethoditi 3 do 4 dana disfunkcije crijeva. Respiratorni sindrom karakteriziraju umjerena hiperemija i zrnatost ždrijela, meko nepce i palatinski lukovi, nazalna kongestija, kašalj, koji su, za razliku od ARVI, manje izraženi, nemaju tendenciju povećanja i kratkotrajni su (4 - 5 dana). Proljev se javlja u 95-97% bolesnika. Za infekciju rotavirusom karakterizira razvoj gastroenteritisa, manje enteritisa. Stolica je obično tekuća, vodena, pjenušava, slabo obojena, bez nečistoća ili s malom količinom sluzi. Kod male djece prevladava vodeni proljev, što objašnjava češći razvoj ekscikoze u ovoj dobnoj skupini. Učestalost stolice u prosjeku ne prelazi 4 do 5 puta dnevno, ali može doseći 15 do 20 puta kod mlađe djece. Trajanje proljeva u odraslih i starije djece je 3 - 7 dana, u dojenčadi često traje do 10 - 14 dana. Povraćanje je kardinalni simptom i zabilježeno je u 80% bolesnika s infekcijom rotavirusom. Najčešće se javlja istodobno s proljevom ili mu prethodi. Povraćanje se često ponavlja, ali kratkoročno (1-2 dana). Ponovljeno i nekontrolirano povraćanje zbog ove infekcije nije tipično i često ukazuje na mješovitu infekciju. Temperatura, u pravilu, ne prelazi 38,5 - 39 ° C i normalizira se za 3-4 dana bolesti. Najčešći znakovi opće intoksikacije su slabost, letargija, slabost, glavobolja, vrtoglavica. Ozbiljnost bolesti određena je razvojem izotonične egzicoze, I - II stupnja, rjeđe III stupnja, što je češće u dojenčadi. Istodobno, gubici elektrolita (Na i K) su mali, što se mora uzeti u obzir pri provođenju rehidracijske terapije.

4. Dijagnoza i diferencijalna dijagnoza

Objektivnim pregledom u bolesnika uočena je letargija, konjuktivna hiperemija i vaskularna injekcija bjeloočnice. Jezik umjereno obložen, suh. Trbuh je mekan, umjereno bolan na palpaciji u području tankog crijeva. Jetra i slezena nisu povećane. Slijepi i sigmoidni debelo crijevo meko, bezbolno. Krvni tlak je smanjen. Puls nije prenatrpan, nego je skloniji relativnoj bradikardiji. Nema meningealnih pojava. U perifernoj krvi, na samom početku bolesti, može doći do umjerene leukocitoze, od 2 do 3 dana bolesti postoji tendencija prema leukopeniji uz smanjenje broja leukocitnih uboda i povećanje broja limfocita i monocita, ESR nije ubrzan.

U laboratorijskoj analizi mokraće javlja se lagana albuminurija, brzo prolazna mikrohematurija, blagi porast broja leukocita i moguća pojava hijalinskih cilindara. Promjene u urinu su u skladu s težinom bolesti i dehidracijom.

Mikroskopski pregled fecesa broj leukocita ne prelazi 10 - 15 u vidnom polju, postoji smjesa sluzi.

Rektoromanoskopski je moguće otkriti umjerenu hiperemiju sluznice rektuma i sigmoidnog kolona bez fokalnih promjena.

Rotavirusni gastroenteritis dijeli se prema težini, što je određeno intenzitetom proljeva i njegovom dehidracijom, kao i ozbiljnošću opće intoksikacije. Postoje tri stupnja ozbiljnosti rotavirusnog gastroenteritisa: blaga, umjereno teška i rjeđe teška.

Diferencijalna dijagnoza se provodi uz salmonelozu, koleru, dizenteriju, toksikokinfekciju uzrokovanu hranom uzrokovanom uvjetno patogenim mikroorganizmima, persiniozu i drugim virusnim gastroenteritisom.

Gastrointestinalni oblik salmoneloze karakterizira istovremena bolest osoba koje su jele loše kvalitete. Tipično akutni početak: hipertermija, jaka zimica, povraćanje, jaka bol u trbuhu, obilna fetidna stolica koja zadržava svoj fekalni karakter, neutrofilnu leukocitozu s pomakom leukocitne formule u lijevo. Kod salmoneloze nema promjena u sluznici ždrijela, jetre se obično povećava. Izolacija patogena u bakteriološkom ispitivanju fecesa, povraćanja ili ispiranja želuca rješava dijagnozu.

Prema mnogim kliničkim znakovima mase i brzini bolesti, rotavirusni gastroenteritis može nalikovati koleri. No, infekcija rotavirusom se razlikuje po blažem tijeku, a posebice po tome što ne razvija stanje algida, kao i prisutnost tipičnih promjena u sluznici orofarinksa.

Najvažniji su rezultati bakterioloških istraživanja u slučaju otkrivanja Vibrio cholerae. Slična je situacija s NAG-infekcijom.

Bakterijska dizenterija karakterizira akutna bol u trbuhu, česta, ponekad lažna, urgentna, stolica pomiješana sa sluzom i krvlju, obilježena sigmoiditisom, konstantna febrilna reakcija, patološke promjene u distalnom dijelu debelog crijeva prema rektoskopiji. Svi ovi znakovi, kao i rezultati bakterioloških istraživanja, relativno olakšavaju provođenje diferencijalne dijagnostike oblika kolitisa dizenterije. Kod gastroenteričnog oblika dizenterije, vrijednost bakterioloških rezultata ispitivanja dramatično se povećava.

Diferencijalna dijagnostika rotavirusnog gastroenteritisa i toksikoinfekcija uzrokovanih oportunističkim patogenima posebno je otežana s obzirom na nedovoljno poznavanje kliničke slike tih bolesti. Prema dijagnostičkom značenju laboratorijskih ispitivanja, prednost treba dati pozitivnim rezultatima viroloških i imunoloških studija koje potvrđuju rotavirusnu prirodu bolesti, a ne na otkrivanje uvjetno patogenih bakterija u stolici pacijenta.

Za gastrointestinalni oblik perinioze karakterističan je postepeniji početak, prisutnost, uz gastroenteritis, bolova u mišićima i zglobovima; jetra je obično povećana; stolica je viskozna zbog značajne mješavine sluzi, a ponekad je moguće i krv. U krvi je zabilježena leukocitoza; ESR se povećao.

Gastroenteritis sindrom može biti istaknut u nekim virusnim bolestima. To uključuje adenovirusnu infekciju, koja je osim crijevnih lezija karakterizirana konjunktivitisom, rinitisom, faringitisom, tonzilitisom, bronhitisom, upalom pluća, povećanjem limfnih čvorova vrata, jetrom, slezenom, produljenom temperaturom.

Od enteritisa i gastroenteritisa, uzrokovanog enterovirusima Koksakija i ECHO, rotavirusni gastroenteritis karakterizira monosindromična klinička slika, u kojoj je vodeće mjesto u crijevnim oštećenjima. Nasuprot tome, tijekom epidemijskih epidemija enterovirusne prirode, prisutnost različitih kliničkih oblika bolesti je zabilježena, "višestrukost" kliničke slike, u kojoj simptomi oštećenja membrane mozga, kože i gornjih dišnih putova mogu igrati značajnu ulogu.

Diferencijalna dijagnoza rotavirusne infekcije s kolibacilozom u djece je najteža i može se temeljiti na sljedećim kriterijima:

- veći akutni početak rotavirusne infekcije u usporedbi s kolibacilozom, posebno uzrokovanu enteropatogenom kolibacilozom;

- brži oporavak od infekcije rotavirusom, čak i kod male djece;

- veća učestalost respiratornog sindroma u slučaju rotavirusne infekcije, ali njegova manja ozbiljnost i trajanje.

Najveća poteškoća je dijagnoza miješanih rotavirusno-bakterijskih infekcija, čiji je udio u zimskim sezonama prilično velik (7 - 10% svih OKI).

Značajka klinike mješovitih infekcija je prisutnost kompleksnih simptoma karakterističnih za obje kombinirane infekcije: povećanje simptoma intoksikacije, pojava znakova upalnih promjena u sluznici tankog i debelog crijeva te sporiji oporavak.

Hospitalizacija djece i odraslih osoba sa sumnjom na OGI uzrokovana rotavirusima provodi se prema kliničkoj (težini bolesti) i epidemiološkim indikacijama (prisutnost slabe djece u okruženju pacijenta, djeca prve godine života, pohađanje ustanova predškolske djece, djelatnici prehrambene industrije, te osobe izjednačene s njima) nemogućnost poštivanja anti-epidemijskog režima kod kuće itd.). Djeca mlađa od jedne godine s teškim simptomima OCI hospitalizirana su najprije. Obvezna je zasebna hospitalizacija bolesnika sa sumnjom na rotavirusni gastroenteritis i akutne crijevne infekcije različite etiologije (odvojeni odjeli, kutije). Mora se poštovati načelo jednokratnog punjenja komora (kutija).

Liječenje pacijenata s rotavirusnim gastroenteritisom, uzimajući u obzir postojeće ideje o patogenezi ove bolesti, uključuje štedljiv režim i kompenzaciju za povrede funkcionalnog stanja crijeva, obnovu ravnoteže hidroelektrolita i detoksikaciju tijela.

U vrijeme akutnog razdoblja bolesti propisana je dijeta 4-B, u kojoj postoji oštra restrikcija ugljikohidrata (do 200 g) i povećanje količine proteina (do 150 g) uz blagi pad u kalorijskom sadržaju (2400 kal). Količina šećera je ograničena na 40 g dnevno, povrće i voće. Mlijeko je isključeno. Sol nije ograničena.

Prikazana je svrha domaćih probavnih multienzimskih pripravaka kao što su oraz, solizim, somilaza, koji u liječenju bolesnika s rotavirusnim gastroenteritisom nije lošiji od uvoza (panzinorm, digestal, festal, trienzim, itd.).

Nužno je ocijeniti stupanj dehidracije organizma i provoditi terapiju s ciljem obnavljanja viška gubitaka vode i soli. Kada je dehidracija I - II stupanj prema V.I. Otopine glukoze i elektrolita daju se Pokrovskom (rehidronski glukozolan), uzimajući u obzir gubitak tekućine i elektrolita, a nakon dehidracije III stupnja potrebno je započeti liječenje intravenskom primjenom vodeno-solnih otopina (trisol, kvartosol, chlosol, acesol) itd.

Taktika uvođenja rješenja provodi se u skladu s načelima rehidracijske terapije.

Da biste stabilizirali normalnu cirkulaciju krvi i detoksikaciju, možete unijeti koloidne otopine (gemodez, polyglukin, reopolyglukine).

Mora se naglasiti da propisivanje antibakterijskih lijekova, ako nema popratne bakterijske infekcije, nije opravdano.

Preporučljivo je koristiti adsorbens i adstrigentne lijekove.

Liječenje infekcije virusom trenutno nije razvijeno.

Ekstrakt oporescenta provodi se nakon stabilne (unutar 2 - 3 dana) normalizacije stolice i nestanka svih drugih kliničkih simptoma osnovne bolesti u odsutnosti komplikacija.

Djeci koja pohađaju predškolske ustanove, djelatnike prehrambene ustanove i osobe izjednačene s njima, nakon nestanka kliničkih simptoma provodi se jednokratno virološko ispitivanje.

Preostali kontingenti pacijenata ne podliježu obveznom laboratorijskom pregledu.

6. Laboratorijska dijagnostika

Laboratorijska dijagnostika rotavirusnog gastroenteritisa trenutno nije teška. Brz razvoj kliničkog sindroma i kratkotrajni boravak u bolnici diktira potrebu za uporabom brzih metoda za određivanje etiologije bolesti. Većina laboratorijskih dijagnostičkih metoda preporučenih u ovom priručniku omogućuje vam otkrivanje rotavirusa tijekom prvog dana. Odabir metode u svakom slučaju određen je tehničkom opremom laboratorija, kao i raspoloživošću odgovarajućih reagensa.

U retrospektivnoj analizi bolesti važne su tradicionalne metode otkrivanja seroloških promjena u serumu bolesnika (reakcija neutralizacije, inhibicija hemaglutinacije i fiksacija komplementa). Stoga se za ranu serološku dijagnostiku rotavirusne infekcije preporučuje određivanje protutijela klase IgM.

Cilj virološke studije bolesne osobe je obično feces. Prisutnost i distribucija rotavirusa u okolišu otkriva se ispitivanjem uzoraka tla, hrane i vode (otpadne vode, vode iz prirodnih i umjetnih akumulacija, pitke vode).

6.1. Detekcija rotavirusa u kliničkom materijalu

i uzorcima iz okoliša

6.1.1. Priprema uzoraka za ispitivanje; uzimanje uzorka

Pri uzimanju uzoraka za virološka istraživanja ispunjeni su neki opći zahtjevi, pri čemu se poduzimaju mjere zaštite materijala od kontaminacije. Uzorci se uzimaju samo u sterilnim posudama s gustim gumenim čepom, ojačanim ljepilom. Transportirati uzorke u spremnike s ledom ili rashladnim sredstvom.

6.1.2. Priprema suspenzije, pojašnjenje,

čišćenje uzoraka, uklanjanje bakterijske flore

Priprema uzoraka fecesa za ispitivanje rotavirusa uključuje pripremu 10% suspenzije, homogenizaciju, centrifugiranje na 3000 okr / min. unutar 30 minuta da se ukloni bakterijska flora. Kod ispitivanja predmeta okoliša i prehrambenih proizvoda provodi se predkoncentracija ispitivanog materijala.

6.1.3. Koncentracija virusnih čestica u uzorcima vode

Koncentracija rotavirusa je važan uvjet za povećanje učinkovitosti njihove detekcije u vodnim tijelima okoliša.

Metoda koncentriranja rotavirusa primjenom adsorpcijske kromatografije na poroznom silicijevom dioksidu - makroporoznom staklu (MPS) - jednostavna je i praktična, uz korištenje volumena vode od 0,1 do 10 litara. Kada se uzorak prođe kroz sloj MPS-a, virus se sorbira na površini stakla. Za ispiranje virusa upotrebom otopina koje imaju sposobnost da uzrokuju desorpciju virusa. Virus se uklanja iz stakla malim volumenom otopine, što dovodi do koncentracije od nekoliko desetina do stotina puta u usporedbi s izvornim uzorkom.

Kako bi se poboljšala svojstva adsorpcije, domaći pripravci stakla marke MPS-1000 VGH tretiraju se kako slijedi: priprema se smjesa (1: 1) od 3% HO i 6 M HCl. Staklo se puni pripremljenom mješavinom brzinom od 1 volumena stakla za 2 volumena smjese. Kuhati u digestoru (bez čepa) 1 sat, poštujući mjere opreza. Isperite destiliranom vodom do neutralnog pH. Suši se na 100 ° C.

Staklena kolona, ​​prethodno obrađena silikonskom tekućinom, napunjena staklom (2 - 3 cm3), Potopljena u destiliranoj vodi. U ispitni uzorak (3 1) dodajte 1 M otopinu MgCl do konačne koncentracije od 0,05 M. Voda se propušta kroz kolonu brzinom od 150-500 ml / sat, podešavajući brzinu protoka pomoću kvačica. Proći kroz kolonu 10 ml otopine za ispiranje: 3% -ni mesni ekstrakt, pH 9,0; ili bujon triptoza fosfata 1%, pH 9,0; ili Tris HCl 0,1 M, koji sadrži 2 M NaCl, pH 11,0 (otopine su navedene prema redukciji njihovih eluirajućih svojstava). Frakcije se sorbiraju s volumenom od 1 ml, pH u frakcijama dovede do neutralne vrijednosti.

6.2. Detekcija virusnih čestica elektronskom mikroskopijom (EM) i imunoelektronskom mikroskopijom (IEM)

Budući da je sadržaj čestica rotavirusa u izmetu tipičnih bolesnika obično visok u prva 2-3 dana bolesti, EM metoda se široko koristi za otkrivanje rotavirusa, koji se može koristiti za otkrivanje čestica rotavirusa bez dodatne koncentracije fekalne suspenzije.

Za pripremu lijekova, kapljica istraživane 10% suspenzije se nanosi na ploču zubnog voska ili voskom. Na kapi filma-supstrata nanesite predmetnu elektronsko-mikroskopsku rešetku. Nakon 1 - 3 minute rešetka se pere na kapi destilirane vode i kontrastne otopine (2% otopina fosforotungtinske kiseline, namjesti se na pH 6,5 - 6,6 s 1 NKOH), čiji višak nakon 30 - 40 sekundi. uklonite filter papir i mreža se osuši. Pregled preparata provodi se u elektronskom mikroskopu s instrumentalnim povećanjem od 30 - 50000x.

Rotavirusi se vrlo lako detektiraju EM ispitivanjem fekalnih suspenzija u karakterističnim veličinama i morfologiji virusnih čestica. Rotavirusi bi se trebali razlikovati od raznih virusnih čestica i virusa sličnih formacija, čestica bakteriofaga i bakterijske flagele pronađene u fekalnom materijalu.

Primjena IEM tehnologije u nekim slučajevima omogućuje ne samo povećanje postotka otkrivanja rotavirusa, nego i dokazivanje njihove etiološke uloge. Za IEM studiju, 0,1 ml razrijeđenog imunog seruma životinja pomiješan je s 0,4 ml ekstrakta fekalija od 10%. Smjesa se inkubira 1 sat na sobnoj temperaturi, a zatim 12 sati na 4 ° C, nakon čega se centrifugira 90 minuta. pri 15.000 okretaja u minuti Supernatant se isuši, a nastali precipitat se resuspendira u nekoliko kapi destilirane vode, u kontrastu s 2% -tnom otopinom fosfoortungstične kiseline (pH 6,5) i stavi na rešetke predmeta; višak vlage se uklanja s filter papirom. Proučavanje lijekova provodi se u elektronskom mikroskopu s instrumentalnim povećanjem od 50000x, promatrajući najmanje pet stanica subjektne mreže. U slučaju pozitivnog rezultata, čestice rotavirusa se otkrivaju u pripravcima u obliku specifičnih klastera (imunološki kompleksi).

6.3. Detekcija antigena rotavirusa u ispitnom materijalu

6.3.1. Dobivanje imunoreagenata

Hiperimuni serumi i specifični rotavirusni imunoglobulini dobiveni su imunizacijom kunića, zamoraca, pilića.

Antigen za imunizaciju pripravljen je kako slijedi: 5 ml suspenzije kulture rotavirusa SA-II tretirano je tripsinom, dodano u tikvice od 1,5 litre s monoslojem heteroploidnih stanica bubrega zelenog majmuna 4647, inkubirano 60 minuta na 37 ° C; dodati medij za održavanje bez seruma i inkubirati 24 do 48 sati na 37 ° C. Sva biomasa je podvrgnuta trostrukoj smrzavanju ili sonifikaciji, dodana je PEG M 6000 do koncentracije od 8-10%, ostavljena 20 sati na 4 ° C, zatim centrifugirana na 10.000 okretaja u minuti. 2 sata Peleta se resuspendira u PBS (1/30 - 1/50 volumena biomase). Nakon čišćenja s freonom 113, vodena faza se koristi za imunizaciju životinja i kao antigen u imunološkim istraživanjima. Koncentrat u volumenu od 1 ml sadrži najmanje 10 virusnih čestica.

Imunizacija kunića: kunići se injiciraju intravenozno s 2 ml pripravka rotavirusa 1., 7., 35. i 42. dana, a krv se uzima 49. dan nakon početka imunizacije. U danima 1 i 35, antigen se injektira s dodatnim Freundovim potpunim adjuvantom na nekoliko točaka leđa.

Imunoglobulinska frakcija taloži se iz hiperimunog zečjeg seruma s 10% vodenom otopinom polietilen glikola (PEG) molekulske mase 6000. Precipitat se prikupi centrifugiranjem, otopi i dijalizira s 0,01 M K-fosfatnim puferom (pH - 7,4) sa 0,01 M Nace ( FSB). Koncentracija imunoglobulina određena je spektrofotometrijski.

Imunizacija zamoraca: životinjama se intramuskularno injicira 0,5 ml koncentriranog rotavirusnog pripravka s jednakim volumenom Freundovog potpunog adjuvanta 1.14 i 28. dana, uzimanjem krvi dva tjedna nakon posljednje imunizacije.

Imunizacija pilića: 20-tjedne kokoši nosilja hibrida pasmine bijele Leggorn "Zarya-17" imunizirane su intravenozno na 1, 14, 28 dana. Tijekom prve imunizacije, antigen se primjenjuje dodatno intramuskularno u smjesi s jednakim volumenom Freundovog potpunog adjuvanta. Maksimalna količina antitijela u žumanjku opažena je nakon treće imunizacije. Pilići se mogu koristiti trajno nakon reimunizacije.

Izolacija pilića imunoglobulina: žumanjak je odvojen od proteina u ljusci ili Büchnerovom lijevku i ispran vodom iz slavine. Žumanjak (10 ml) se prenese u epruvetu za centrifugiranje, doda dvostruki volumen (20 ml) FSB-a i dobro se promiješa. PEG 6000 se primjenjuje na koncentraciju od 3.5% (w / v) i miješa se 10 minuta. na 14000 g. Supernatant se filtrira kroz filter papir u stupnjeviti cilindar. Doda se dodatni PEG 6000 do konačne koncentracije od 12% i miješa. Istaloženi imunoglobulini sakupljeni su centrifugiranjem (10 min. 14,000). Talog se otopi u 5 ml FSB (1/2 volumena žumanjka). Koncentracija proteina u pripravku je obično 6 - 12 mg / ml.

6.3.2. Metoda imunoanaliza enzima (ELISA)

Metoda imunoanaliza enzima (ELISA), koja se temelji na upotrebi antitijela označenih enzimskom molekulom (peroksidaza), jedna je od najčešćih i najučinkovitijih i specifičnih metoda za detekciju virusnog antigena. Obično koriste izravne i neizravne "sendviče" - opcije. Enzimski marker otkriven u reakciji boje s supstratom. Izravna ELISA varijanta je brža od neizravne, ali je manje osjetljiva i specifična. U formulaciji indirektne varijante koristi se anti-specifični komercijalni konjugat imunoglobulina s enzimom; Da bi se spriječile nespecifične interakcije između konjugata i antitijela koja su sorbirana na ploči, potrebno je imati antivirusne serume dviju različitih životinjskih vrsta.

Indirektna ELISA varijanta: 0,1 ml anti-trom-tonskih imunoglobulina iz žumanjaka jaja imuniziranih pilića na pola (48) jažica se uvode u jažice. U drugoj polovici, imunoglobulini iz jaja položenih prije imunizacije su uvedeni kao negativna kontrola. Sorpcija imunoglobulina provodi se iz otopine koncentracije 5 μg / ml u PBS-u preko noći na 4 ° C. Sadržaj jažica se isprazni, bunari se isperu s PBS-T i 0,1 ml testnog uzorka se nanese u PBS-T s 1% BSA i 0,01 M EDTA u jažice s antirotavirusom i normalnim imunoglobulinima i inkubira se 1 sat na 37 ° C.

Nakon ispiranja, 0,1 ml zečjeg anti-rotavirusnog seruma razrijeđenog na 1: 1000-1: 25000 doda se u jažice u PBS-T puferu. Optimalno razrjeđivanje seruma određeno je u prethodno postavljenim eksperimentima. Paneli su zatvoreni i inkubirani 2 sata na 37 ° C. Jažice su isprane i dodano je 0,1 ml komercijalnog pripravka antitijela obilježenih peroksidazom protiv zečjeg IgG u koncentraciji od 1 do 2,5 μg / ml u sadržaju peroksidaze u PBSB-T-BSA i inkubirana tijekom 1 sata na 37 ° C. Jažice se isperu, doda 0,1 ml svježe pripremljene smjese supstrata (O-fenilen-diamin 0,5 mg / ml u 0,05 M Na-citratnom puferu pH 5,0; HO - 0,03%). budite oprezni!)) i inkubirajte na sobnoj temperaturi u mraku 30-40 minuta. Enzimska reakcija se zaustavlja dodavanjem 0,05 ml 3 M HSO. Rezultati reakcije uzimaju se u obzir vizualno ili spektrofotometrijski. Uzorci se smatraju pozitivnima, čija optička gustoća nije manja od 2 puta od optičke gustoće negativne kontrole.

6.3.3. Metoda koaglutinacije

Ova metoda temelji se na sposobnosti proteina A Staphylococcus aureus Cowan soja da se poveže s Fc-fragmentom IgG, te tijekom stvaranja specifičnog kompleksa antigen-antitijelo uzrokuje fenomen aglutinacije.

Za formulaciju reakcije koaglutinacije koristi se komercijalno suhi stafilokokni reagens koji sadrži protein A (Pasteur Research Institute of Electrochemical Medicine, Leningrad), koji se rehidrira prije upotrebe u 0,1% -tnoj otopini metilen plavog.

Prethodno je svaka serija hiperimunog seruma testirana na prisutnost antistafilokoknih antitijela. Da biste to učinili, na staklenoj pločici pomiješajte jednake količine seruma u razrjeđenju od 1: 500 i 10% suspenzije stafilokoka. Uzmite u obzir rezultate u roku od 5 minuta od obrazovanja aglutinata. Za rad odabranog seruma, koji ne sadrže antistafilokokna antitijela u razrjeđenju od 1: 500. Za pripremu dijagnostike, 0,01 ml anti-ratavirusnog seruma razrijeđenog 1:10 s FSB pomiješa se s 0,5 ml 10% -tne suspenzije stafilokoka, drži se na sobnoj temperaturi 1 sat, zatim se doda 9,5 ml FSB (dijagnostički). Na isti način, stafilokoki su senzibilizirani preimunskim serumom (kontrolni reagens). Dijagnostički i kontrolni reagens koriste se u reakciji PKA i TRKA.

Za postavljanje RCA u u-oblikovane jažice panela, napravite 0,05 ml PBS-a 7,4; u dvije jažice napravite takacchi mikrotitar ili dozator 0,05 ml 10% suspenzije fecesa i pripremite serijska dvostruka razrjeđenja od 1: 2 - 1: 256. U bunare prvog reda dodajte 0,05 ml dijagnostičkog sredstva, te u bunare drugog reda 0,05 ml kontrolnog reagensa. Ploče su pokrivene poklopcem i inkubirane u termostatu na 37 ° C - 3 sata. U svakom eksperimentu, uzorak suspenzije fecesa pozitivan i negativan za rotavirus, kao i lizati stanica inficiranih s rotavirusom SA-II, testiran ranije elektronskom mikroskopijom.

Razmatranje reakcije: rezultati se smatraju pozitivnim kada se zajedno s dijagnostikom detektira "kišobran" aglutinacije, s negativnim rezultatom ili 4-struko smanjenje titra paralelno s kontrolnim reagensom. Rezultati se smatraju negativnim kada se diskovi formiraju u oba paralelna reda. Kako bi se uklonila nespecifična koaglutinacija u parnim redovima, suspenzija izmetu se adsorbira s jednakim volumenom normalnog seruma zeca na 37 ° C tijekom 2 sata, nakon čega slijedi zagrijavanje na 80 ° C tijekom 45 minuta. Zatim ponovno doživite reakciju koaglutinacije.

6.3.4. Postupak reakcije koaglutinacije u krutoj fazi (TRKA)

Ova metoda otkrivanja antigena rotavirusa temelji se na principima metode imunotestom na čvrstoj fazi (vidi 4.3.2). Međutim, za razliku od potonjih, TRCA ne koristi enzim kao oznaku, već kao dijagnostički i kontrolni reagens (vidi 4.3.3).

Za postavljanje TRKA koriste se imunološke ploče s u-obliku bunara. Za senzibilizaciju se u jažice doda 0,1 ml hiperimunog seruma razrijeđenog s 0,01 M karbonat-bikarbonatnim puferom (pH 9,6) 1: 1000. Ploče seruma ostavljene su 2 do 3 sata na 37 ° C. Nevezana na krutu fazu antitijela se uklanjaju ispiranjem tri puta tijekom 3 minute. FSBT. Nakon toga napravite 0,05 ml ispitivanih, kao i očito pozitivnih i negativnih uzoraka (2 jažice za svaki uzorak) u jažicama i ostavite 2 sata na 37 ° C da se formiraju kompleksi antigen-antitijelo. Nevezani antigen i srodne nečistoće uklanjaju se trostrukim pranjem PBS-a. Zatim, u jednu jažicu dodajte 0,05 ml 0,5% stafilokoknog dijagnostike, u drugoj (kontrolnoj) 0,05 ml 0,5% suspenzije stafilokoka senzibiliziranog preimunim serumom (vidi 4.4.3). Inkubacija se provodi 1 do 2 sata na 37 ° C, nakon čega slijedi stavljanje 1 do 3 sata na 4 ° C, ili 18 do 24 sata na 4 ° C. Rezultat reakcije aglutinacije uzima se u obzir vizualno: s pozitivnom reakcijom, aglutinirane bakterije tvore kišobran; s negativnom reakcijom - bakterije se potpuno talože u obliku diska.

6.3.5. Metoda neizravne hemaglutinacije

U ovoj metodi, detekcija antigena rotavirusa temelji se na upotrebi dijagnostičkog antitijela eritrocita, koji je eritrocit ovaca senzibiliziran imunoglobulinskom tekućinom ascitesa bijelih štakora imuniziranih rotavirusom SA-II.

Dvostruka razrjeđenja 10% -tne fekalne suspenzije u jažicama na ploči testirana su s dijagnostikom eritrocita. Aglutinacija eritrocita dijagnostika ukazuje na prisutnost antigena rotavirusa u uzorku. Detaljan opis postupka za formulaciju PHA naveden je u uputama priloženim uz komplet za pripremu (Znanstveno-proizvodna udruga "Rostepidkompleks", Rostov-na-Donu).

Komplet Rotatest temelji se na reverznoj pasivnoj hemaglutinaciji i namijenjen je otkrivanju rotavirusa u fecesu i otkrivanju antitijela protiv rotavirusa u krvnim serumima.

6.3.6. Metoda imunocitokemijske detekcije rotavirusa

Metoda se temelji na imunokemijskom određivanju virusnog antigena sintetiziranog u stanicama kao rezultat njihove infekcije materijalom koji sadrži virus.

Prednost metode u usporedbi s ELISA-om je veća osjetljivost, kao i sposobnost određivanja i kvantificiranja infektivnosti ispitnog uzorka.

Postupak eksperimenta: transplantirane stanice bubrega zelenog majmuna u koncentraciji od 3 do 10 stanica / ml čine 0,2 ml u jažicama ploča s ravnim dnom i inkubiraju na 37 ° C (24 do 48 sati). Stanice su zatim isprane Eagle-MEM medijem. Ispitni materijal je razrijeđen u Eagle-MEM mediju, aktiviran 1 sat na 37 ° C u prisutnosti 10 ug / ml tripsina i dodan u 0,1 ml u najmanje 4 jažice. Pozitivne kontrole su jažice u koje je umetnut materijal za koji se zna da sadrži rotavirus. Negativne kontrole: jažice s neinficiranim stanicama i jažicama u koje se uvodi materijal sličan testu, ali ne sadrži rotaviruse. Adsorpcija se provodi 1 sat na 37 ° C, zatim se medij ukloni, stanice se isperu s Eagle-MEM medijem. Dodajte 0,2 ml Eagle-MEM medija s 1 μg / ml tripsina u jažice i inkubirajte 48 sati na 37 ° C.

Stanice su dvaput isprane slanom otopinom i fiksirane hladnim (-20 °) 85% acetonom, inkubirane 2 sata na -20 ° C, zatim je uklonjen aceton. Panel se ispere 3 puta s PBS koji sadrži 0,05% Tween 20 (PBS-T). U jažice se doda 0,1 ml razrijeđenog 1: 1000 u serumu protiv rotavirusa PBS-T imunog bjesnoće. Inkubirati 2 sata na 37 ° C. Nakon ispiranja panela, 0,1 ml anti-IgG protutijela obilježenog peroksidazom (komercijalni pripravak) doda se u jažice u jažici, u koncentraciji od 2 μg / ml sadržajem peroksidaze u PBS-u s 1% BSA i inkubira 1,5 sat na 37 ° C. C.

Ploča je isprana 2 puta s PBS-T i 1 put s 0.05 M acetatnim puferom, pH 5.0. U jažice se doda 0,1 ml svježe pripravljene otopine supstrata peroksidaze koja sadrži 10 ml acetatnog pufera / 4 mg 3-amino-9-etilkarbazola (AEC) otopljenog u 0,5 ml acetona i 0,01 ml 33% vodikovog peroksida. (Pažnja! Rad s AEC-om zahtijeva oprez). Inkubirajte 30-40 minuta. u mraku na sobnoj temperaturi. Reakcija se zaustavlja ispiranjem ploče destiliranom vodom.

Računovodstvo reakcije provodi se pod svjetlosnim mikroskopom s malim povećanjem. Negativne kontrolne jažice ne smiju sadržavati obojene stanice. Lokalni skupovi obojenih stanica su žarišta virusne infekcije.

6.3.7. Metoda imunofluorescencije

Za identificiranje antigena rotavirusa primjenom imunofluorescencije, koristi se stanična linija 4647. Stanice se uzgajaju na pokrovnim listićima ili preparatima zatvorenim u bočicama ili epruvetama penicilina. Inficirana kultura je inkubirana na 37 ° C tijekom 24 do 48 sati, nakon čega su čaše uklonjene iz bočica, isprane u 0,15 M otopini soli uz dodavanje fosfatnog pufera pH 7,2, isprane destiliranom vodom i osušene na zraku. Zatim se pripravci fiksiraju u dvije smjene (svaka po 10 minuta) kemijski čistog acetona ohlađenog na 4 ° C.

Pripravci se tretiraju indirektnom metodom u vlažnoj komori. Jedna kap imunog rotavirusnog zečjeg seruma nanosi se na stanice kulture i inkubira 30 minuta. na 37 ° C, zatim se lijekovi tri puta peru u FSB i uklanjaju višak vlage. Mokri pripravci su obojeni mješavinom jednakih volumena anti-FITC-konjugata i goveđeg albumina, obilježenih rodaminom, i inkubirani 30 minuta. na 37 ° C. Nakon 3 puta pranja u FSB, pripravci se suše na zraku. Da bi se eliminirala nespecifična fluorescencija, antivirusni serum se adsorbira prije upotrebe s homogenatom normalne kulture stanica, a FITC konjugat se tretira s aktivnim ugljenom prema standardnim metodama.

Sljedeće kontrole se koriste kao obvezne kontrole: preparati neinficiranih kultura tretirani na sličan način i pripravci zaraženih kultura tretirani u prvoj fazi normalnog i heterolognog antivirusnog seruma iste vrste kao i imunološki serum do rotavirusa.

U slučaju pozitivnih rezultata, u citoplazmi stanica uočena je izrazito svijetlozelena fluorescencija.

6.4. Metoda elektroforetizacije rotavirusa

Metoda se temelji na identifikaciji rotavirusa uporabom elektroforeze poliakrilamidnog gela virusnih genomskih RNA segmenata. Metoda omogućuje diferencijaciju sojeva rotavirusa na temelju razlika u elektroforetskoj pokretljivosti pojedinih segmenata RNA različitih izolata i stoga se naširoko koristi u epidemiološkim studijama. Metoda ne zahtijeva pred-uzgoj izolata, ima visoku osjetljivost i apsolutnu specifičnost.

Metoda je od posebnog interesa za epidemiologe u istraživanju grupnih bolesti epidemija rotavirusne infekcije.

Može se izvesti na temelju laboratorija opremljenih elektroforeznim aparatima.

Za analizu je dovoljna 0,2 - 0,5 ml 10 - 20% fekalne suspenzije. Suspenzije se tretiraju freonom 113 i inkubiraju s pronazom (0,2 mg / ml, 15 minuta) u prisutnosti natrijevog dodecil sulfata (1%) i natrijevog etilendiamintetraacetata (0,001 M). Nakon dodavanja natrij acetata (0,3 M), RNA se deproteinizira sa smjesom fenola: kloroform-izoamil alkohola i istaloži se s 2,5 volumena etanola (18 sati na -20 ° C ili 2 sata na -70 ° C). Talog se prikupi centrifugiranjem, otopi u vodi i doda se disocijacijski pufer. Elektroforeza se provodi prema metodi Laemmli u pločama od 10% gela. Srebrni nitrat (0.011 M) se obično koristi za bojenje RNA u gelu. Nakon postupka manifestacije u gelu, vidljivo je 11 traka RNA, koje odgovaraju genomskom segmentu rotavirusa.

6.5. Određivanje imunoglobulina klase M u serumu

bolesnika s rotavirusnom infekcijom metodom krute faze

reakcije koaglutinacije (TRCA)

U ovom slučaju, u modifikaciji se rabi princip koaglutinacijske reakcije u čvrstoj fazi (vidi 4.3.4): za senzibilizaciju ploče s uzorkom upotrijebite 0,1 ml komercijalnog janjećeg monospecifičnog seruma protiv humanog IgM, u razrjeđenju od 1: 1000. Paneli su inkubirani 2-4 sata na 37 ° C. Zatim se jažice isperu s FSBT, napune s 3% -tnom otopinom želatine i ostavi se 30 minuta na 37 ° C. Jažice su isprane FSBT i čine 0,05 ml ispitivanog, kao i namjerno pozitivnog i negativnog seruma, razrijeđenog 1: 100 FSBT (2 rupe za svaki serum). Pri određivanju titra antitijela ispituje se dvostruko razrjeđivanje ispitivanih uzoraka (1:10 - 1: 1280). Ploče se inkubiraju 2 sata na 37 ° C i nakon pranja se u uparene jažice unese 0,05 ml dijagnostičkog i kontrolnog reagensa. Reakcija se uzima u obzir nakon 1 - 2 sata (vidi gore 4.3.4).

Isti princip, modificiran TRCA, koristi se za testiranje IgA i IgG antitijela za rotavirusnu infekciju, kao iu analizi kolostruma i mlijeka za laktoglobuline.

Metoda određivanja imunoglobulina klase M u serumu pacijenta koristi se za ranu dijagnostiku manifestnih oblika i njihovu diferencijalnu dijagnozu s asimptomatskim oblicima rotavirusne infekcije.

7. Anti-epidemijske mjere

Svakom slučaju akutne crijevne infekcije uzrokovane rotavirusima, posebice djecom prve godine života, kao i djecom koja pohađaju predškolske ustanove, potrebna je pažljiva epidemiološka analiza kako bi se utvrdio izvor, glavni načini i čimbenici prijenosa u svrhu pravodobne provedbe anti-epidemijskih mjera. u izbijanju.

Mjere usmjerene na utvrđivanje i neutralizaciju izvora infekcije. Otkrivanje pacijenata koji sumnjaju na bolest provode liječnici svih zdravstvenih ustanova: tijekom ambulantnih posjeta, kućnih posjeta, liječničkih pregleda djece u ustanovama, bolnicama i sl. Identificirani pacijenti su izolirani iz dječjih skupina. Medicinsko promatranje i liječenje bolesnika može se provesti kod kuće ili u bolnici. Djeca koja pohađaju dječje ustanove otpuštene iz bolnice ili koji su završili kućno liječenje negativnim laboratorijskim testovima primaju se u skupine djece na temelju potvrde pedijatra. Djeca koja su imala WG i nastavljaju izlučivati ​​rotaviruse (ili antivirusni rotavirus) s izmetom bez kliničkih manifestacija infekcije mogu se primiti u vrtićima i vrtićkim skupinama vrtića-vrtića koji podliježu organizaciji kontinuiranog medicinskog promatranja i ponovljenog laboratorijskog pregleda u 2 do 3 tjedna. od početka bolesti ili izolacije virusa.

Epidemiološko ispitivanje obiteljskih žarišta bolesnika s FG provodi se s bolešću djece mlađe od 2 godine i odraslih od broja određenih kontingenata. Epidemiolog odlazi u dječju ustanovu s pregledom ako se ponavljaju slučajevi ne-bakterijskog gastroenteritisa.

Medicinsko promatranje djece u komunikaciji s pacijentima provodi se u roku od pet dana od dana izolacije posljednje bolesne osobe.

Laboratorijsko testiranje rotavirusa (antigena) djece i odraslih koji su komunicirali s pacijentima, kako u obitelji tako iu organiziranim skupinama, provodi se prema uputama infektologa i epidemiologa ako postoje indikacije (pojava u obitelji ili u dječjem timu ponovljenih bolesti OKI sa sličnom klinikom), grubo kršenje sanitarnog i higijenskog režima, prisutnost u izbijanju radnika prehrambenih poduzeća i osoba izjednačenih s njima itd.). Obvezno laboratorijsko ispitivanje podliježe majci bolesnog djeteta u prvoj godini života. Osobe kod kojih se rotavirusi (antigeni) nalaze u fecesu podliježu temeljitom kliničkom pregledu specijalista za zarazne bolesti. U nedostatku kliničkih manifestacija bolesti, djeca i zaposlenici iz tima nisu izolirani.

Zaposlenici prehrambenih poduzeća, vodovodne usluge itd. u vrijeme ponovnog laboratorijskog pregleda i liječničkog nadzora u objektu. Ponovljene laboratorijske pretrage osoba koje izlučuju rotaviruse (antigene) s izmetom, provode se prema receptu infektologa i epidemiologa u razmaku od 5 do 7 dana, uz uporabu opsežnog laboratorijskog pregleda.

Ako se grupne bolesti javljaju u dječjim ustanovama, mjere karantene provode se u roku od 5 dana od trenutka izolacije posljednjeg bolesnika.

Institucije redovito provode sanitarni i obrazovni rad s ciljem sprečavanja infekcije rotavirusom.

Mjere usmjerene na razbijanje mehanizma prijenosa infekcije.

Istraživanja su pokazala štetan učinak na rotaviruse na +70 ° C nakon 15 minuta; kada su izloženi ultraljubičastom zračenju, rotavirusi se također inaktiviraju i nakon 15 minuta.

S obzirom na njihovu otpornost na djelovanje široko korištenih dezinficijensa, rotavirusi su bliski enterovirusima i hepatitisu A. Stoga je u centrima rotavirusne infekcije iu bolnicama gdje ima pacijenata, preporučljivo provoditi mjere dezinfekcije prema režimima i korištenjem sredstava preporučenih za virusni hepatitis. A i enterovirusne infekcije (Dodatak N 4 uz Naredbu Ministarstva zdravlja SSSR-a N 752 od 07/08/81 i Naredba Ministarstva zdravlja SSSR-a N 916 od 08/04/83). Posebnu pozornost treba posvetiti pravilnom rukovanju rukama osoba koje služe djeci, kao i bradavicama, igračkama, posuđu i drugim predmetima za njegu bolesnika.

Preporučuje se redovito ultraljubičasto zračenje. Ultraljubičasto zračenje se obično izvodi pomoću ozračivača - OBN-150 na 30 kubičnih metara. m soba, OBP-300 60 cu. m soba i drugih. Nezaštićeni dovodi postavljeni po stopi od 1 - 1,5 W po 1 cu. m sobe u nedostatku ljudi (kako bi se izbjeglo oštećenje sluznice očiju), zaštićen - po stopi od 2 - 2,5 W po 1 cu. m, ozračivanje se može provesti u prisutnosti ljudi. Vrijeme dezinfekcije - 30 - 40 minuta. Zračenje zraka treba provoditi nakon čišćenja prostorije, mijenjanja posteljine i drugih radova vezanih uz stvaranje prašine.

U specijaliziranim odjelima bolničkog osoblja treba nositi respiratorne maske.

Organizacija sanitarnih i higijenskih mjera usmjerenih na prevenciju rotavirusne infekcije provodi se u skladu s važećim uputama i preporukama za druge infekcije s fekalno-oralnim mehanizmom širenja patogena.

Jedna od učinkovitih mjera za sprječavanje infekcije rotavirusom kod novorođenčadi je njihovo dojenje.

Ne provodi se specifična prevencija rotavirusne infekcije.